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組織甘油三酯檢測試劑盒操作方法詳解！

描述：

甘油三酯是由甘油和脂肪酸酯化而成，是血脂的主要成分，也是機體重要的供能物質。高甘油三酯和高膽固醇血癥是常見的高脂血癥，與許多疾病相關。與血漿甘油三酯測定相比，實體組織和細胞的甘油三酯測定并非易事。本試劑盒避免了有毒的lv仿甲醇提取、繁雜的氮氣吹干和脂質復溶等步驟，采用能試劑進行組織細胞裂解和甘油三酯抽提，而且優化了GPO Trinder酶學反應組分和操作步驟。簡單易行、靈敏度高檢測范圍為 20-2000µmol/L。可用于測量動植物組織細胞、固態食品材料、高濃度油料樣品中的甘油三酯含量。

原理：

（1）脂肪酶分解血清中的甘油三酯為甘油；（2）甘油激酶將甘油化為3-甘油；（3）3-甘油被甘油氧化酶氧化產生過氧化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍：適用于動物實體組織、培養細胞、油料植物組織、固態食品組織、高濃度油料樣品中甘油三酯含量的測定。

操作方法：

組織細胞裂解：
   在裂解前，組織或者細胞用PBS洗滌兩次以去除甘油
1. 原代脂肪細胞：200g，5分鐘離心收集細胞。建議每100 µl壓積（Packed Cell Volume）脂肪細胞加入1ml裂解液，震蕩裂解，而后室溫靜置10分鐘。
2. 分化脂肪細胞或非脂肪細胞：可先用胰酶消化、離心收集細胞而后進行裂解，也可直接在培養皿內進行裂解。通常情況下，可按比例每1x106 個細胞加入0.1ml裂解液，混勻后室溫靜置10分鐘。
3. 動物組織：離心管稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織重量(約50mg)。強烈建議按比例每1mg組織加20µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質含量變異而產生的誤差。強烈建議裂解液用量在1ml左右，保證有效的勻漿裂解與脂質提取。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方法，因其不能*和均勻破碎。應根據預實驗調整初始的組織細胞加入量），勻漿后靜置10分鐘。
4. 植物油料種子、食品、含高油量樣品：用減量稱重法對樣品進行稱重，建議按比例每1mg組織加20µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質含量變異而產生的誤差。加入裂解液后可用研缽對樣品進行研磨，而后將研磨液轉移到新的離心管中，室溫靜置10分鐘。

組織甘油三酯檢測試劑盒操作方法詳解！

二. 裂解液處理：
1. 取適量上清液轉移到1.5ml離心管中，進行步驟2的操作。余下的裂解液可用BCA法蛋白定量試劑盒(#P1511)進行蛋白定量或－20ºC儲存。
2. 70ºC 加熱10分鐘，組織量多時可能出現絮狀沉淀。
3. 室溫2000rpm離心5分鐘，上層清液即可用于酶學測定。

二 工作溶液配制：按4:1比例，取4ml試劑R1與1ml試劑R2混合即可，立即使用或4ºC保存<1天，變色棄去。

三 標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4mM甘油標準品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設置0濃度對照反應管。

注意事項：

1.  維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、強還原劑二硫蘇糖醇、巰基乙醇等會干擾測。高濃度EDTA會干擾測定。

2.  樣本即使保存在-20ºC的環境下，甘油三酯也會自發水解。因此建議樣品4ºC保存時間應短于24小時，當-70ºC保存時，也應不超過1個月。

3.  如果室溫較低，應延長反應時間或在37ºC進行反應。

4.  不同類型組織和細胞內甘油三酯含量差別很大，應根據預實驗調整初始的裂解液的加入量。對于脂肪組織而言，一般來說裂解液用量在20-30mg/ml即可。

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