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信帆生物-酵母轉化試劑盒酵母感受態細胞的制備
更新時間:2020-05-11   點擊次數:1291次

信帆生物-酵母轉化試劑盒酵母感受態細胞的制備

 

酵母感受態細胞的制備:

1.活化菌種。-80℃保存的菌種在固體YPDA培養基(YPDA加20g Agar/L)上劃線,在30℃培養2-4天。

2.挑取酵母單菌落在固體YPDA培養基上劃3-5 mm的duan線,在30 ℃培養2-4天。待酵母單菌落長至2 mm長時,接種。

3.首先把酵母細胞接種到3 ml液體YPDA培養基中,30℃過夜培養。

4.第二天轉接到含有30 ml液體YPDA培養基的三角瓶中繼續培養,待OD600到0.4-0.5范圍內。收集細胞,1000 g,離心5 min, 去上清。

5.沉淀用30-50 ml的無菌的去離子水懸浮。1000 g,離心5 min,去上清。

6.沉淀用合適體積的100 mM LiAc懸浮(30 ml的酵母菌zui多用不超過1 ml的100 mM LiAc懸浮,通常100 μl的酵母細胞用于轉化一個質粒,即一個反應)。

7.把酵母細胞的懸浮液分裝到1.5 ml的離心管中,每管分裝100 μl,用于轉化一個質粒即一個反應。1000 g,離心5 min,去上清。制備好的感受態細胞備用。

 

注意事項:

1. 初次使用Carrier DNA,請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃儲存備用。下次使用時請在冰上解凍Carrier DNA。

2. PEG溶液在低溫環境下會析出,請于常溫環境下*溶解后使用。

3. 轉化全程要無菌操作。

 

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ELISA試劑盒:進口ELISA試劑盒,國產ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
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血清:胎牛血清,人血清,動物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
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放免試劑盒:進口放免試劑盒,國產放免試劑盒,進口美國鳳凰等放免試劑盒。
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