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南京信帆-DiO(細胞膜綠色熒光探針)大促
更新時間:2020-05-22   點擊次數:686次

南京信帆-DiO(細胞膜綠色熒光探針)大促

 

DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強,這類染料有著很高的淬滅常數和激發態壽命。一旦對細胞染色,這類染料在整個細胞膜上擴散,*濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏色區分明顯:DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)和 DiR(深紅色熒光)這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發,有著比DiI更長的激發波長和發射波長,在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織,在活體成像中用來示蹤。

使用方法

1. DiD,DiO,DiI,DiR和DiS細胞膜染色液制備
(1)配置DMSO或EtOH 儲存液:儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。
注意:未使用的儲存液保存在-20℃,避免反復凍融。
(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~
5 µM的工作液。
注意:工作液的終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找*條件。

DiO(細胞膜綠色熒光探針)染色方法!

2. 懸浮細胞染色
(1)懸浮細胞密度為 1 × 10^6/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培養細胞 2~20分鐘,不同的細胞*培養時間不同。
(3)染色細胞試管在1000~1500轉離心5分鐘。
(4)傾倒上清液,再次緩慢加入預溫37℃的培養液。
(5)重復(3),(4)步驟兩次以上。

3. 粘壁細胞的染色
(1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養。
(2)從培養基中移走蓋玻片,吸走過量培養液,將蓋玻片放在潮濕的環境中。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。
(4)在37 ℃培養細胞 2~20分鐘,不同的細胞*培養時間不同。
(5)吸干染料工作液,用培養液洗蓋玻片2~3次,每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞,培養5~10分鐘,然后吸干培養基

 

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