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快速Lowry法蛋白質含量測定試劑盒
更新時間:2021-06-09   點擊次數:641次

快速Lowry法蛋白質含量測定試劑盒

 

Lowry法包括兩步反應:第一步是在堿性條件下,蛋白質與銅作用生成蛋白質-銅絡合物;第二步是此絡合物將Folin試劑還原,產生深藍色,顏色深淺與蛋白質含量成正比。定量范圍為5~100μg/ml蛋白質。Folin試劑顯色反應由酪氨酸、色胺酸和半胱胺酸引起,因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用。此外,不同蛋白質因酪氨酸、色胺酸含量不同而使顯色強度稍有不同。

Lowry法測定較為不受脂類物質干擾,適于脂類含量較高的樣品測定。也能耐受相當濃度的去垢劑如SDS。

操作說明:
1.根據需要量,取適量 Folin 酚甲試劑 A 和 B 按 50:1 混合,混合后有效期為 24 小時,過期失效。
2.根據需要量,取適量 BSA 標準品用 PBS 稀釋稀釋 10 倍至濃度 0.5mg/ml。
若采用酶標儀法(96 孔)
3.將標準品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul 加到 96 孔板中,加 PBS 補足到 20ul。
4.將樣品作適當稀釋(好多做幾個梯度),加 20ul 到 96 孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時
的誤差,標準線前面的點誤差比較大,所以盡可能的讓樣品點落在標準線 1/2 后。
5.將配好的 Folin 酚甲試劑每孔加入 200ul,輕輕震動,混勻,室溫放置 10 分鐘。
6.各孔加入 20 微升 Folin 酚乙試劑,迅速混勻,37℃放置 30 分鐘。用酶標儀測定 A650 計算蛋白
濃度。

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