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2022產(chǎn)品更新-Poly(A)聚合酶
更新時(shí)間:2022-12-27   點(diǎn)擊次數(shù):400次

2022產(chǎn)品更新-Poly(A)聚合酶


描述:本E. coli Poly(A) Polymerase 為高效加A 聚合酶,該酶以RNA為模板在RNA的3′末端加入20~200 個(gè)A堿基。可應(yīng)用于增強(qiáng)mRNA 的穩(wěn)定性,及microRNA 加A 尾,為cDNA 合成提供oligo-dT 引物結(jié)合位點(diǎn)等。該酶以單鏈RNA作為引物,ATP 作為底物進(jìn)行聚合反應(yīng)。




操作方法:
1. 按以下組分配制反應(yīng)體系
E. coli Poly(A) Polymerase(5U/μl)    1 μl
10×EPAP Reaction Buffer    2 μl
10 mM ATP    2 μl
25 mM MnCl2    2 μl
RNA    0.5~10 μg
ddH2O    Up to 20 μl

2. 混合均勻后,37°C 反應(yīng)1 小時(shí)。即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注:不同的實(shí)驗(yàn)需要加A 的量會(huì)有所不同,可通過(guò)減少反應(yīng)時(shí)間來(lái)調(diào)整加A 的長(zhǎng)度,該酶在37°C 反應(yīng)30 分鐘時(shí)可加30 個(gè)A 堿基,1 小時(shí)可加100 個(gè)A 堿基。

活性定義:
在37℃、pH7.9 的條件下,以ATP 為底物,10 分鐘內(nèi)把1 nmol 的AMP 聚合到RNA 上所需要的酶量定義為1 個(gè)活性單位(U)。


應(yīng)用:
? RNA 3' 標(biāo)記
? microRNA 加A 尾,為cDNA 合成提供oligo-dT 引物結(jié)
合位點(diǎn)
? 增強(qiáng)RNA 穩(wěn)定性
儲(chǔ)存:
-20°C 可保存2 年。


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