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線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ檢測試劑盒使用方法
更新時間:2021-09-06   點擊次數:611次

線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ檢測試劑盒使用方法


產品說明:線粒體復合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同時輔基FAD還原為FADH2,后者進一步還原氧化型輔酶Q 生成還原型輔酶Q,是呼吸電子傳遞鏈的支路。復合體Ⅱ的催化產物還原型輔酶Q可進一步還原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰,通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計算該酶活性。


注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。


需自備的儀器和用品:可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、丙酮、冰和蒸餾水。 


注意事項: 

1、 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于1.5),可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計算結果時注意乘以稀釋倍數。若ΔA大于0.4,需將樣本稀釋適當倍數(計算公式中乘以相應稀釋倍數);若ΔA偏小,則可以通過增加加入的樣本體積來提高靈敏度。

2、 樣本蛋白濃度需自行測定。由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

3、 推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活,若用樣本質量計算,則需加測胞漿提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方為總酶活。 4、 本試劑盒試劑足夠完成25管反應。

 5、 附:使用樣本重量計算公式:(樣本檢測數為 25T/12S) A、上清中復合體II活力的計算: 單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。復合體II活性(U/g 質量)=[ΔA1×V反總÷(ε×d)×109]÷(W÷V提取×V樣本))÷T=476.2×ΔA1÷W ΔA1:上清測定值;V反總:反應體系總體積,10-3L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數,2.1×104L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V提?。杭尤胩崛∫后w積,1mL;V樣:加入樣本體積,0.05mL;T:反應時間,2min;W:樣本重量,g;109:單位換算系數,1mol=109nmol。 

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